الهدف هو استخدام خلايا كلى جنينية بشرية 293 (HEK293) لمراقبة تغييرات التعبير والتوزيع لوحدات قناة البوتاسيوم الداخلية الموجهة بواسطة بروتين G (GIRK) وهي GIRK1 وGIRK2 بعد تحمل المورفين. الطريقة: استخدام خلايا HEK293 محورة فيروسياً حاملًا pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR لبناء خلايا مستقرة تعبر بشكل زائد عن GIRK1 وGIRK2 ومستقبلات μ الأفيونية (MOR). معالجة هذه الخلايا المستقرة بالمورفين (1 ميكرومول/لتر، 24 ساعة) لبناء نموذج خلايا HEK293 المتحملة للمورفين. فحص توزيع وتشارك موقع MOR مع GIRK1 وGIRK2 في النموذج الخلوي بواسطة التألق المناعي الخلوي. قياس تغير محتوى cAMP بواسطة ELISA لتأكيد بناء نموذج تحمل المورفين. كشف تغيرات توزيع ومستوى بروتينات GIRK1 وGIRK2 بعد تحمل المورفين باستخدام التألق المناعي و Western blot. قياس شدة التألق بواسطة جهاز متعدد الوظائف للكشف عن تغيرات جهد غشاء الخلية بعد تحمل المورفين. النتائج: في خلايا HEK293 المستقرة، أظهر التألق المناعي الكيميائي أن GIRK1 وGIRK2 يعبران بشكل رئيسي على الغشاء الخلوي مع بعضها في السيتوبلازم، ويتشارك MOR المكان مع GIRK1 وGIRK2 وكذلك بين GIRK1 وGIRK2. مقارنة مع المجموعة الضابطة، في مجموعة معالجة المورفين لمدة ساعة واحدة، انخفض محتوى cAMP بشكل ملحوظ (1.42±0.07 مقابل 0.72±0.12، P=0.0010)، وفي مجموعة معالجة 24 ساعة، ارتفع cAMP بشكل ملحوظ (0.72±0.12 مقابل 1.98±0.17، P=0.0005). أظهر التألق المزدوج بعد 24 ساعة معالجة مورفين زيادة ملحوظة في GIRK1 (13.76±7.67 مقابل 3.72±16.02، P<0.0001) وGIRK2 (7.16±2.61 مقابل 2.92±7.67، P=0.0029) في السيتوبلازم لمجموعة التحمل. أظهر التحليل الغربي انخفاضًا ملحوظًا في تعبير بروتينات الغشاء GIRK1 (1.11±0.14 مقابل 0.85±0.01، P=0.0045) وGIRK2 (1.32±0.02 مقابل 0.86±0.08، P=0.0001) بعد تحمل المورفين. أظهر قياس جهد الغشاء انخفاضًا ملحوظًا في استجابة فرط الاستقطاب في الخلايا المتحملة (-15.53±0.12)% مقابل (-8.17±0.11)%، P<0.0001. الخلاصة: المعالجة المزمنة بالمورفين يمكن أن تحفز تقليل تعبير GIRK1 وGIRK2 على غشاء خلايا HEK293 المستقرة.

المورفين; التحمل; خلايا كلى جنينية بشرية 293; وحدة قناة البوتاسيوم الداخلية الموجهة بواسطة بروتين G 1; وحدة قناة البوتاسيوم الداخلية الموجهة بواسطة بروتين G 2