Objectif : sélectionner et identifier les protéines clés du virus de la variole du singe (MPXV) régulant le signal de l'inflammasome de type NLRP3 associé au domaine protéique du récepteur de type NOD. Méthodes : en utilisant le génome de la souche épidémique nationale de MPXV comme matrice, une banque de plasmides d'expression génique virale potentiellement impliquée dans la régulation de l'inflammation a été construite (82 plasmides au total). Les plasmides d'expression eucaryote pour NLRP3, la protéine apoptotique associée au domaine de procaspase (ASC), la caspase-1, et le précurseur d'interleukine 1β portant un gène rapporteur luciférase (pro-IL-1β-Luc), ainsi que les plasmides viraux, ont été co-transfectés dans des cellules HEK293T. L'activation de la voie signal de l'inflammasome NLRP3 a été monitorée par la mesure de l'activité de la luciférase dans le surnageant cellulaire, permettant de sélectionner les gènes viraux inhibant de manière significative la production d'IL-1β mature. L'effet inhibiteur a été confirmé par western blot (WB), et les interactions avec les composants de l'inflammasome NLRP3 ont été identifiées par co-immunoprécipitation (Co-IP). Le motif d'interaction a été caractérisé par mutagenèse ciblée. Résultats : un système de criblage de la signalisation de l'inflammasome NLRP3 a été construit et optimisé avec succès. En l'utilisant pour criblage de la banque de plasmides d'expression MPXV, l'effet d'inhibition le plus prononcé a été observé avec B10R sur la production d'IL-1β mature (P < 0.0001), avec une inhibition dose-dépendante. Il a été démontré que B10R interagit avec pro-IL-1β, tandis que le mutant du motif C-terminal B10Rmut-C (T96A, Y97A, I98A) perdait cette capacité. Conclusion : la protéine MPXV B10R peut interagir avec pro-IL-1β et inhiber la production d'IL-1β mature, et le motif C-terminal (T96, Y97, I98) de B10R est crucial pour sa fonction. Cette étude fournit des indices et des bases pour comprendre davantage les mécanismes moléculaires de la régulation par MPXV du signal de l'inflammasome NLRP3.

Récepteur de type NOD associé au domaine protéique NLRP3; Inflammasome; Virus de la variole du singe; Interleukine 1β; B10R