L'objectif était d'utiliser les cellules embryonnaires rénales humaines 293 (HEK293) pour observer les changements d'expression et de distribution des sous-unités GIRK1 et GIRK2 du canal potassique rectificateur entrant contrôlé par la protéine G (GIRK) après la tolérance à la morphine. Méthodes : Les cellules HEK293 ont été transfectées avec un lentivirus pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR pour générer des cellules stables surexprimant GIRK1, GIRK2 et le récepteur μ-opioïde (MOR). Ces cellules stables ont été traitées avec de la morphine (1 μmol/L, 24 h) afin de construire un modèle cellulaire de tolérance à la morphine. La distribution et la colocalisation du MOR avec GIRK1 et GIRK2 ont été détectées par immunofluorescence. Le contenu en cAMP a été mesuré par ELISA pour confirmer l'établissement du modèle. Les changements de distribution et du niveau protéique de GIRK1 et GIRK2 après tolérance ont été évalués par immunofluorescence et western blot. Une lecture multifonctionnelle a mesuré l'intensité de fluorescence pour détecter les changements du potentiel membranaire après tolérance. Résultats : Dans les cellules HEK293 stables, l'immunofluorescence a montré que GIRK1 et GIRK2 s'exprimaient principalement sur la membrane plasmique avec une faible présence dans le cytoplasme; MOR colocalisait avec GIRK1 et GIRK2, ainsi que GIRK1 avec GIRK2. Par rapport au groupe témoin, le groupe traité à la morphine pendant 1 h a montré une baisse significative du cAMP (1,42±0,07 contre 0,72±0,12, P=0,0010), tandis que le groupe traité pendant 24 h a montré une augmentation significative (0,72±0,12 contre 1,98±0,17, P=0,0005). Le double marquage fluorescent a révélé une augmentation significative de GIRK1 (13,76±7,67 contre 3,72±16,02, P<0,0001) et GIRK2 (7,16±2,61 contre 2,92±7,67, P=0,0029) dans le cytoplasme du groupe tolérant après 24 h de traitement. Le western blot a montré une réduction significative de l'expression membranaire des protéines GIRK1 (1,11±0,14 contre 0,85±0,01, P=0,0045) et GIRK2 (1,32±0,02 contre 0,86±0,08, P=0,0001) après tolérance. La détection du potentiel membranaire a montré un affaiblissement significatif de la réponse d'hyperpolarisation dans les cellules tolérantes (-15,53±0,12)% contre (-8,17±0,11)%, P<0,0001. Conclusion : Un traitement chronique à la morphine peut induire une réduction de l'expression membranaire de GIRK1 et GIRK2 dans les cellules HEK293 stables.

morphine; tolérance; cellules embryonnaires rénales humaines 293; sous-unité du canal potassique rectificateur entrant contrôlé par la protéine G 1; sous-unité du canal potassique rectificateur entrant contrôlé par la protéine G 2