Целью является отбор и идентификация ключевых белков вируса оспы обезьян (MPXV), регулирующих сигналы воспалительного комплекса NLRP3, связанного с доменом NOD-подобного рецептора. Методы: используя геном доминирующего внутри страны штамма MPXV в качестве шаблона, была создана библиотека экспрессионных плазмид вирусных генов, которые, возможно, обладают функциями регуляции воспаления (всего 82). Плазмиды для эукариотической экспрессии NLRP3, ASC, Caspase-1, pro-IL-1β-Luc с люциферазным репортером и вирусных генов были ко-транспфицированы в клетки HEK293T. Активация сигнального пути воспалительного комплекса NLRP3 контролировалась по активности люциферазы в супернатанте клеток, что позволило отобрать вирусные гены, эффективно подавляющие образование зрелого IL-1β. Подтверждение ингибирующей активности проводилось методом вестерн-блоттинга (WB), а взаимодействие с компонентами комплекса NLRP3 — коиммунипресипитацией (Co-IP). Мотив взаимодействия определялся с помощью мутаций в ключевых участках. Результаты: успешно создана и оптимизирована система скрининга сигнала воспалительного комплекса NLRP3. С ее помощью была отобрана библиотека экспрессии генов MPXV, где наиболее заметное подавление продукции зрелого IL-1β показал B10R (P < 0.0001), ингибирующее действие носило дозозависимый характер. Установлено, что B10R связывается с pro-IL-1β, а мутант в С-концевом мотиве B10Rmut-C (T96A, Y97A, I98A) утратил способность к взаимодействию с pro-IL-1β. Заключение: белок MPXV B10R способен взаимодействовать с pro-IL-1β и подавляет образование зрелого IL-1β, при этом С-концевой мотив белка B10R (T96, Y97, I98) жизненно важен для его функции. Исследование предоставляет сведения и обоснование для дальнейшего изучения молекулярных механизмов регуляции сигнала комплекса NLRP3 вирусом MPXV.

NOD-подобный рецептор; воспалительный комплекс; вирус оспы обезьян; интерлейкин-1β; B10R