Objetivo: seleccionar e identificar las proteínas clave que regulan la señal inflamatoria del inflamasoma NLRP3 asociado al receptor tipo NOD en el virus de la viruela del mono (MPXV). Métodos: usando el genoma de la cepa epidémica nacional del MPXV como plantilla, se construyó una biblioteca de plásmidos de expresión genética viral con posible función reguladora de la inflamación (total 82). Se co-transfectaron en células HEK293T plásmidos de expresión eucariota para NLRP3, la proteína asociada a manchas relacionadas con la apoptosis (ASC), caspasa-1, el precursor de interleucina 1β con gen reporte de luciferasa (pro-IL-1β-Luc), junto con plásmidos genéticos virales. Se monitorizó la activación de la vía señal del inflamasoma NLRP3 midiendo la actividad de la luciferasa en el sobrenadante celular, permitiendo seleccionar genes virales que inhiben notablemente la producción de IL-1β madura. Se confirmó la inhibición por blotting de proteínas (WB), y las interacciones con los componentes del inflamasoma NLRP3 se identificaron mediante co-inmunoprecipitación (Co-IP). El motivo de interacción se identificó por mutación de sitios clave. Resultados: se construyó y optimizó con éxito un sistema de selección para la señal del inflamasoma NLRP3. Usando este sistema para cribar la biblioteca de expresión de MPXV, el B10R mostró la inhibición más notable de la producción de IL-1β madura (P < 0.0001), con efecto dosis-dependiente. Se identificó que B10R se une a pro-IL-1β, mientras que la mutación en el motivo C-terminal B10Rmut-C (T96A, Y97A, I98A) perdió la capacidad de interacción. Conclusión: la proteína B10R de MPXV puede interactuar con pro-IL-1β e inhibir la producción de IL-1β madura, siendo el motivo C-terminal de B10R (T96, Y97, I98) crucial para su función. Este estudio proporciona pistas y fundamentos para entender los mecanismos moleculares de la regulación del inflamasoma NLRP3 por MPXV.

Receptor tipo NOD; inflamasoma; virus de la viruela del mono; interleucina 1β; B10R