El objetivo fue utilizar células de riñón embrionario humano 293 (HEK293) para observar los cambios en la expresión y distribución de las subunidades GIRK1 y GIRK2 del canal de potasio rectificador interno regulado por proteína G (GIRK) después de la tolerancia a la morfina. Método: Se utilizaron células HEK293 transfectadas con lentivirus pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR para construir células HEK293 estables que sobreexpresan GIRK1, GIRK2 y el receptor μ-opioide (MOR). Estas células estables se trataron con morfina (1 μmol/L, 24 h) para construir un modelo de tolerancia a la morfina. La inmunofluorescencia celular detectó la distribución y colocalización de MOR con GIRK1 y GIRK2 en el modelo celular. ELISA midió los cambios en el contenido de cAMP para confirmar la construcción del modelo de tolerancia a la morfina. La inmunofluorescencia y el western blot detectaron los cambios en la distribución y niveles de proteína de GIRK1 y GIRK2 después de la tolerancia. Un lector multimodal midió la intensidad de fluorescencia para detectar los cambios en el potencial de membrana celular después de la tolerancia. Resultados: En células HEK293 estables, la inmunofluorescencia mostró que GIRK1 y GIRK2 se expresan principalmente en la membrana celular con algo en el citoplasma, MOR se colocaliza con GIRK1 y GIRK2, y GIRK1 y GIRK2 también se colocalizan. En comparación con el grupo control, el grupo tratado con morfina durante 1 hora mostró una disminución significativa de cAMP (1.42±0.07 vs. 0.72±0.12, P=0.0010), mientras que el grupo tratado durante 24 horas mostró un aumento significativo (0.72±0.12 vs. 1.98±0.17, P=0.0005). La tinción fluorescente doble mostró que después de 24 horas de tratamiento con morfina, el grupo tolerante mostró un aumento significativo de GIRK1 (13.76±7.67 vs. 3.72±16.02, P<0.0001) y GIRK2 (7.16±2.61 vs. 2.92±7.67, P=0.0029) en el citoplasma. El western blot mostró una disminución significativa en la expresión de las proteínas de membrana GIRK1 (1.11±0.14 vs. 0.85±0.01, P=0.0045) y GIRK2 (1.32±0.02 vs. 0.86±0.08, P=0.0001) después de la tolerancia. La detección de potencial de membrana mostró una respuesta de hiperpolarización significativamente disminuida en las células tolerantes (-15.53±0.12)% vs. (-8.17±0.11)%, P<0.0001. Conclusión: El tratamiento crónico con morfina puede inducir la reducción de la expresión de GIRK1 y GIRK2 en la membrana de células HEK293 estables.

morfina; tolerancia; células de riñón embrionario humano 293; subunidad del canal de potasio rectificador interno regulado por proteína G 1; subunidad del canal de potasio rectificador interno regulado por proteína G 2