Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ＲＮＡ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ

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ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｌｅｎｃｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅｏｆＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ

更新时间：2023-12-12

- ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｌｅｎｃｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅｏｆＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ
- Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences) Vol. 34, Issue 6, (2013)
- 作者机构：
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  CLC：
- Online First：20 November 2013，
  
  Published：2013
- 稿件说明：
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ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｌｅｎｃｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅｏｆＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2013, 34(6).
DOI：

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＳｉｌｅｎｃｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＲＮＡＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅｏｆＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2013, 34(6). DOI：

摘要

【目的】构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体，研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＲＮＡｉ慢病毒表达载体，并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞，ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞生长周期情况；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ，ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达水平。【结果】成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲＲＮＡｉ慢病毒表达载体，转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞，转染后ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ＜０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ＜０．０５），细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加，Ｓ期细胞比例减少（Ｐ＜０．０５）。加入雌激素后，三组细胞的生长速度加快，细胞Ｓ期的比例增加，转染组增殖抑制明显（Ｐ＜０．０５），Ｓ期比例降低（Ｐ＜０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ＜０．０５）。【结论】在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期，下调ＥＲ靶基因蛋白表达，ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。

Abstract

【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｂａｓｅｄＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｔａｒｇｅｔｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｔｏｏｂｔａｉｎｓｔａｂｌｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｋｎｏｃｋｄｏｗｎ，ａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｏｗｎ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔｅｓｔｒｏｇｅｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＴｈｅｓｈＲＮＡｏｌｉｇｏｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅｓｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｏＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｇｅｎｅｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｓｈＲＮＡｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｖｅｖｅｃｔｏｒｓ．ＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＩｓｈｉｋａｗａｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ，ａｎｄｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｅｆｆｅｃｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ．ＷｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔＥ２ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴ；ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＥＲｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｃ-ｆｏｓ，ｃｙｃｌｉｎＤ１ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＴｈｅＲＮＡｉｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｔａｒｇｅｔｉｎｇＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｓｅｑｕｅｎｃｅｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＩｓｈｉｋａｗａｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｂｙ８６ａｎｄ６５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｓｈｏｗｅｄａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐａｒｅｎｔａｌｃｅｌｌｓａｎｄｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｄｏｗｎ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｍｏｒｅｐｒｏｎｏｕｎｃｅｄｗｈｅｎ１７β-Ｅ２ｗａｓａｄｄｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｓｈｏｗｅｄａｃｌｅａｒｅｆｆｅｃｔｏｆｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｒｒｅｓｔｅｄｏｎｔｈｅＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔＥ２ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＴｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒｅｄｕｃｅｄｓｈａｒｐｌｙｉｎＳｐｈｒａｓｅ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｄｏｗｎ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｉｎＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＥＲｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｃ-ｆｏｓ，ｃｙｃｌｉｎ-Ｄ１．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｄｏｗｎ-ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙｒｅｄｕｃｅｄｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＧ１-ＳｃｅｌｌｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｓｈｉｋａｗａｃｅｌｌｓｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔＥ２ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．ＴｈｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＲｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｃ-ｆｏｓ，ｃｙｃｌｉｎＤ１．ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲｍｉｇｈｔｂｅａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒ．

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