骨肉瘤细胞外泌体激活肺组织成纤维细胞炎性信号通路

谢显彪; 温丽丽; 吕东明; 李洪波; 刘伟海; 邹雨桐; 姚浩; 沈靖南

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骨肉瘤细胞外泌体激活肺组织成纤维细胞炎性信号通路

基础研究 | 更新时间：2023-11-01

- 骨肉瘤细胞外泌体激活肺组织成纤维细胞炎性信号通路
- Osteosarcoma Cells Derived Exosome Activate Inflammatory Signaling Pathwaysin Lung Fibroblast Cells
- 中山大学学报（医学科学版） 2020年41卷第4期页码：509-514
- 作者机构：
  
  1.中山大学附属第一医院骨肿瘤科，广东广州 510058
  2.广东省骨科学重点实验室，广东广州 510058
  3.中山大学肿瘤防治中心麻醉科，广东广州 510060
- 作者简介：
  
  谢显彪，副主任医师，研究方向：骨肿瘤，E-mail：xiexbiao@mail.sysu.edu.cn
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金(81772864);中山大学青年教师培育项目(19ykpy198)
- DOI：
  中图分类号： R738
- 收稿：2020-03-26，
  
  纸质出版：2020-07-15
- 稿件说明：
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谢显彪,温丽丽,吕东明等.骨肉瘤细胞外泌体激活肺组织成纤维细胞炎性信号通路[J].中山大学学报（医学科学版）,2020,41(04):509-514.

XIE Xian-biao,WEN Li-li,LV Dong-ming,et al.Osteosarcoma Cells Derived Exosome Activate Inflammatory Signaling Pathwaysin Lung Fibroblast Cells[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2020,41(04):509-514.
谢显彪,温丽丽,吕东明等.骨肉瘤细胞外泌体激活肺组织成纤维细胞炎性信号通路[J].中山大学学报（医学科学版）,2020,41(04):509-514. DOI：

XIE Xian-biao,WEN Li-li,LV Dong-ming,et al.Osteosarcoma Cells Derived Exosome Activate Inflammatory Signaling Pathwaysin Lung Fibroblast Cells[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2020,41(04):509-514. DOI：

摘要

目的

本研究旨在研究骨肉瘤细胞来源外泌体对靶器官微环境的调控作用及其分子机制。

方法

提取骨肉瘤细胞143B外泌体并鉴定，通过PKH26荧光染色后经尾静脉注入裸鼠体内，24 h后提取肝、脾、肺、肾及脑组织，荧光显微镜下计数不同视野红色荧光数量；通过免疫荧光检测不同类型细胞中外泌体摄取情况；143B外泌体与人肺成纤维细胞共培养，荧光显微镜检测摄取情况，进一步利用qPCR检测炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平，通过蛋白印迹法检测炎性信号通路NF-κB通路p-p65和MAPK通路p-ERK及p-p38的变化。

结果

143B细胞外泌体中TSG101、Flotillin-1、CD63、CD9表达，Calnexin表达缺失(

0.05)；电镜外泌体呈“茶托”样形状，大小为(141.92±52.85) nm；外泌体经裸鼠尾静脉注射后进入肺组织含量显著高于肝、肾、脾、脑等器官（

0.05）；外泌体与人肺成纤维细胞共培养后炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α mRNA水平明显升高（

0.05），同时p-p65，p-ERK及p-p38均显著上调（

0.05）。

结论

骨肉瘤细胞外泌体可激活肺成纤维细胞NF-κB及MAPK炎性信号通路，进而促进炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α产生。

Abstract

Objective

To investigate the function and molecular mechanism of osteosarcoma cells derived exosome on microenvironment of target organs.

Methods

The osteosarcoma derived exosomes were extracted and injected into nude mice through tail vein after PKH26 fluorescence staining. The liver

spleen

lung

kidney and brain tissues were extracted 24 hours later and then the amount of red fluorescence in different fields was counted under fluorescence microscope. The uptake of exosomes in different types of cells was detected by immunofluorescence. 143B derived exosomes were co-cultured with human lung fibroblasts

and the uptake was detected by fluorescence microscopy. The expression levels of inflammatory cytokines IL-1β

IL-6 and TNF-α were detected by RT-qPCR

while the changes of p-p65 in inflammatory signaling pathway of NF-κB and p-ERK

p-p38 in MAPK signaling were detected by western blotting.

Results

TSG101

Flotillin-1

CD63 and CD9 were expressed in 143B derived exosomes

and Calnexin expression was absent (

0.05). The exosomes presented a saucer-like structure under electron microscope. The size of the exosomes is (141.92±52.85) nm. The exosomes distributed more in lung tissue than liver

kidney

spleen and brain after injection through the tail vein of nude mice (

0.05). The mRNA levels of inflammatory cytokines IL-1β

IL-6and TNF-α were significantly increased in human lung fibroblast cells after incubation with 143B exosomes (

0.05). p-p65

p-ERK and p-p38MAPK were significantly up-regulated (

0.05).

Conclusions

Osteosarcoma cells derived exosomes could activate inflammatory signaling pathway NF-κB and MAPK

and up-regulate the expression of the inflammatory cytokines IL-1β

IL-6 and TNF-α in lung fibroblast cells.

关键词

Keywords

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