ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用

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ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用

更新时间：2023-12-12

- ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用
- ＥｎｈａｎｃｅｄＩｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｎｄＰｒｏ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＨｕｍａｎＵｍｂｉｌｉｃａｌＣｏｒｄＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓＭｏｄｉｆｉｅｄｂｙＨＧＦ-ｇｅｎｅａｎｄＣＴＬＡ-４Ｉｇ-ｇｅｎｅ
- 中山大学学报（医学科学版） 2012年33卷第6期
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  中图分类号：
- 网络首发：2012-11-20，
  
  纸质出版：2012
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ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2012,33(6).

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ＨＧＦ与ＣＴＬＡ－４Ｉｇ双基因修饰增强脐带间充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2012,33(6). DOI：

ＥｎｈａｎｃｅｄＩｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｎｄＰｒｏ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＨｕｍａｎＵｍｂｉｌｉｃａｌＣｏｒｄＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓＭｏｄｉｆｉｅｄｂｙＨＧＦ-ｇｅｎｅａｎｄＣＴＬＡ-４Ｉｇ-ｇｅｎｅ[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2012, 33(6). DOI：

摘要

【目的】探讨人脐带间充质干细胞（ｈＵＣＭＳＣ）经肝细胞生长因子（ＨＧＦ）和细胞毒性Ｔ细胞相关抗原４免疫球蛋白（ＣＴＬＡ４－Ｉｇ）双基因修饰后免疫调节能力的变化及其促进肝细胞增殖作用的影响。【方法】酶联合消化法提取并鉴定人脐带间充质干细胞；对照组的ｈＵＣＭＳＣ转染携带绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因的Ａｄ５－ＥＧＦＰ，实验组的ｈＵＣＭＳＣ转染携带ＨＧＦ和ＣＴＬＡ－Ｉｇ双基因的腺病毒Ａｄ５－ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ。流式细胞仪检测对照组ｈＵＣＭＳＣ转染Ａｄ５－ＥＧＦＰ后７２ｈ表达ＥＧＦＰ细胞比率；实验组Ａｄ５－ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ转染ｈＵＣＭＳＣ７２ｈ后，ＣＣＫ８检测细胞存活率，同时再次检测ｈＵＣＭＳＣ免疫表型和向成骨细胞分化的能力，ＥＬＩＳＡ检测细胞上清中ＨＧＦ含量，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞中ＣＴＬＡ４－Ｉｇ蛋白的表达水平，通过ＣＣＫ８法检测双基因修饰后ｈＵＣＭＳＣ对淋巴细胞增殖的影响及其上清对Ｌ０２细胞增殖的影响。【结果】携带外源基因的腺病毒可有效转染ｈＵＣＭＳＣ，不影响其干细胞特性和多向分化能力，经ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ基因修饰ｈＵＣＭＳＣ可分泌高浓度ＨＧＦ并高表达ＣＴＬＡ－４Ｉｇ，同时能有效地抑制淋巴细胞增殖，其上清能明显促进肝细胞增殖。【结论】ｈＵＣＭＳＣ经ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇ基因修饰后生物学特性无明显改变，并能高表达ＨＧＦ和ＣＴＬＡ－４Ｉｇ，其免疫调节及促进肝细胞增殖的能力进一步加强，为肝移植术后存在的肝细胞损伤的保护治疗提供了新思路。

Abstract

【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ｈＵＣＭＳＣ）ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｃａｒｒｙｉｎｇｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ）ａｎｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴ-ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎ４ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ｇｅｎｅｓｓｔｉｌｌｐｒｅｓｅｒｖｅｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｓｗｅｌｌａｓｐｒｏ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ｈＵＣＭＳＣｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＷｈａｒｔｏｎ＇ｓＪｅｌｌｙｔｉｓｓｕｅｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ．ＴｈｅｈＵＣＭＳＣｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｂｙａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ-５ｃａｒｒｙｉｎｇＨＧＦａｎｄＣＴＬＡ４-Ｉｇｇｅｎｅｓ（Ａｄ５-ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ａｎｄｔｈｅｈＵＣＭＳＣｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｂｙａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ-５ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＥＧＦＰｇｅｎｅ（Ａｄ５-ＥＧＦＰ）．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＧＦＰａｎｄｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｈＵＣＭＳＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＡｄ５-ＥＧＦＰａｎｄＡｄ５-ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４ＩｇｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＣｅｌｌＳｏｒｔｅｒａｎｄＣＣＫ８．ＴｈｅｎｔｈｅｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒｔｅｓｔｅｄａｆｔｅｒａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＧＦａｎｄＣＴＬＡ-４ＩｇｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙＥＬＩＳＡａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ７２ｈａｆｔｅｒｈＵＣＭＳＣａｄｅｎｏｖｉｒａｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＬ０２ｃｅｌｌｂｙｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｏｆｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ａｎｄｔｈｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｙｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＣＣＫ８ａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】ＴｈｅｄｏｕｂｌｅｇｅｎｅｓｍｏｄｉｆｉｅｄｈＵＣＭＳＣｐｒｅｓｅｒｖｅｄｔｈｅｓａｍｅｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙａｓｕｎ-ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｈＵＣＭＳＣ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＧＦａｎｄＣＴＡ-４ＩｇｇｅｎｅｓｉｎｈＵＣＭＳＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＡｄ５－ＨＧＦ／ＣＴＬＡ－４Ｉｇｃｏｕｌｄｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄ７２ｈａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｏｆｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＬ０２ｃｅｌｌ．Ｗｈｅｎｃｏ-ｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ），ｔｈｅＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄａｎｄｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｈＵＣＭＳＣ（ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇ）ｄｏｓａｇｅ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ｈＵＣＭＳＣｍｏｄｉｆｉｅｄｂｙＡｄ５-ＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４Ｉｇｈａｖｅｔｈｅｓａｍｅｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙａｓｔｈｏｓｅｕｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｈＵＣＭＳＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｗｉｔｈＨＧＦ／ＣＴＬＡ-４ＩｇｇｅｎｅｓｃａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙｓｕｐｐｒｅｓｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＴｃｅｌｌｓｂｕｔｐｒｏｍｏｔｅＬ０２ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｙＨＧＦａｎｄＣＴＡ-４Ｉｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．

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