【目的】 原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102)

初步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互关系65377;【方法】 将E10-20及E94-102克隆至pGEX-4T-1载体

表达纯化重组蛋白

用Western Blotting和间接ELISA法检测CsLDH免疫血清对表位重组蛋白的识别

同时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体系

比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影响65377;【结果】 成功构建pGEX-4T-1-E10-20及pGEX-4T-1-E94-102重组质粒

SDS-PAGE鉴定表达的重组蛋白

菌体裂解液经亲和层析纯化

获得与GST融合表达的蛋白E10-20及E94-10265377;两表位重组蛋白均可被CsLDH免疫血清识别

而对E94-102更易于识别;重组CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清识别

而不能被对照血清识别65377;E94-102免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸的反应65377;【结论】 表位结构和功能研究深化了对CsLDH结构的理解

并为开辟CsLDH疫苗研究新路径奠定基础65377;