携带EGFP基因的逆转录病毒载体的构建及初步应用

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更新时间：2023-12-08

- 携带EGFP基因的逆转录病毒载体的构建及初步应用
- Construction and Preliminary Application of Retroviral Vector Carrying EGFP Gene
- 中山大学学报（医学科学版） 2009年30卷第2期
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：
  中图分类号： R730.5
- 网络首发：2009-03-20，
  
  纸质出版：2009
- 稿件说明：
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携带EGFP基因的逆转录病毒载体的构建及初步应用[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2009,30(2).

Construction and Preliminary Application of Retroviral Vector Carrying EGFP Gene[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2009, 30(2).
携带EGFP基因的逆转录病毒载体的构建及初步应用[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2009,30(2). DOI：

Construction and Preliminary Application of Retroviral Vector Carrying EGFP Gene[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2009, 30(2). DOI：

【目的】构建携带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的逆转录病毒载体

观察GFP的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响65377; 【方法】以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应

获得完整保留pEGFP-C1载体多克隆酶切位点(MCS)的EGFP基因片段

定向插入逆转录病毒载体pLXSN

筛选出正确的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP

转染PA317包装细胞后获得具有感染能力的病毒颗粒

转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2

通过荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)观察EGFP做为报告基因在体外的表达情况65380;以及对靶细胞生物特性的影响65377; 【结果】成功克隆携带有EGFP基因的逆转录病毒载体

该载体经包装细胞包装后可有效转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2并稳定表达

对靶细胞的生长无抑制65377;高表达GFP的靶细胞形态变得细长

FACS检测约有98%的细胞表达GFP

体外培养6个月荧光强度没有明显的衰减

而低表达GFP的靶细胞形态无变化

FACS检测有30%细胞表达GFP65377; 【结论】使用GFP作为报告基因

检测到的病毒载体转染率比实际偏低

所构建的pLXSN-EGFP载体可在体外稳定表达

为再插入治疗用基因进行后续研究奠定基础65377;

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