【目的】以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型

通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA（siRNA）对酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的沉默效果

筛选获得最有效的小干扰RNA序列

同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组

同时设立阴性对照组和脂质体组（lipofectamine 2000）

瞬时转染原代培养的HFF细胞

采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况

并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡

MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用。【结果】小干扰RNA1

2

3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%

39%

63.2%

以siRNA1最高

最佳浓度为50nmol/L

最佳作用时间为48h。SMPD1蛋白在48h出现沉默效果

96h开始恢复。50nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡

细胞存活率为73.8%

与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义。【结论】三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果

其中siRNA1效果最佳

沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡。