【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2（PTP4A2）基因并高效表达纯化

对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术

从肝癌细胞系HepG2的总RNA中

获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后

通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2

构建重组表达载体

并导入大肠杆菌E.coliBL21中

IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化

western印记进行鉴定

质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应

鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2（全长氨基酸）的基因序列

测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析

在相对分子质量Mr=45000处

有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后

得到了高纯度的融合蛋白

质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因

并在E.coliBL21中高效表达

亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白

质谱检测分子量与预期结果一致

纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。