人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

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更新时间：2023-12-12

- 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化
- Construction, Expression and Purification of Human Plasminogen Kringle 5 Mutant Ⅰ in E. coli
- 中山大学学报（医学科学版） 2004年25卷第3期
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- 网络首发：2004-05-20，
  
  纸质出版：2004
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蔡卫斌. 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2004,25(3).

Construction, Expression and Purification of Human Plasminogen Kringle 5 Mutant Ⅰ in E. coli[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2004, 25(3).
蔡卫斌. 人纤溶酶原 K5 突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2004,25(3). DOI：

Construction, Expression and Purification of Human Plasminogen Kringle 5 Mutant Ⅰ in E. coli[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2004, 25(3). DOI：

【目的】构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1)

在大肠杆菌中表达

亲和层析纯化

为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因

将其克隆进表达载体pET-22b(+)中

并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3)

IPTG诱导表达

表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化

用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段

正确插入pET-22 b(+)载体

在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103

Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白

经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%

获得率约为10 mg/L?【结论】成功构建人纤溶酶原K5 mut1

实现在大肠杆菌中高效表达

亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白?

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