【目的】扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽移酶(mu-classglutathionetransferaseofClonorchissinen-sis

CsGSTM)基因

明确是否存在内含子

进行原核表达

纯化其表达产物

鉴定免疫反应性。【方法】用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增出目的基因

测序

定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)

在大肠杆菌BL21/DE3表达

按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白

用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdode-cylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis

SDS-PAGE)、薄层色谱(thin-layerchromatography

TLC)和免疫印迹(Westernblotting)分析。【结果】CsGSTM基因全长657bp

没有内含子

构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGSTM在大肠杆菌中得到了有效表达

Mr

pET-30a(+)-CsGSTM=31×103。重组蛋白达总蛋白的39%

纯化后的重组蛋白纯度为98%

重组蛋白在纯化前后均有免疫反应性。【结论】CsGSTM基因没有内含子

在大肠杆菌中能有效表达

纯化前后的重组蛋白都具有免疫反应性。