人 resistin 基因原核表达载体构建和表达

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人 resistin 基因原核表达载体构建和表达

更新时间：2023-12-12

- 人 resistin 基因原核表达载体构建和表达
- Construction and Expression of A Prokaryotic Ecxpression Vector Containing Huamn Resistin Gene
- 中山大学学报（医学科学版） 2004年25卷第5期
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：
  中图分类号：
- 网络首发：2004-09-20，
  
  纸质出版：2004
- 稿件说明：
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人 resistin 基因原核表达载体构建和表达[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2004,25(5).

Construction and Expression of A Prokaryotic Ecxpression Vector Containing Huamn Resistin Gene[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2004, 25(5).
人 resistin 基因原核表达载体构建和表达[J]. 中山大学学报（医学科学版）, 2004,25(5). DOI：

Construction and Expression of A Prokaryotic Ecxpression Vector Containing Huamn Resistin Gene[J]. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 2004, 25(5). DOI：

【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达

为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA

RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA

经测序后

PCR产物亚克隆入T载体

用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS

然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接

用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒。重组表达质粒转化大肠杆菌JM109

经1mmol/LIPTG在32℃诱导表达2h

裂解细菌

进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达。【结果】RT-PCR扩增产物分子大小为327bp

序列分析表明为人resistin基因完整编码区。PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后

从细菌质粒中酶切回收了目的片段。重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段

序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区

基因编码无移位

PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】成功构建了人resistin基因原核表达载体

且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白

为下一步研究打下了实验基础。

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