【目的】探讨黏着斑激酶(FAK)397 和925 位酪氨酸残基(Y397

Y925)酪氨酸磷酸化在单轴周期性牵拉引起的 细胞形态改变(垂直于牵拉轴方向排列和伸长)中的作用。【方法】用含100 mL/ L 胎牛血清的DMEM 培养大鼠成纤维细胞 3Y1 。利用PCR 法从人的脐静脉内皮细胞获得FAK cDNA 。通过直接点突变

利用重叠PCR 制成突变的FAK(F397Y

F925Y)。将FAK 突变转染到细胞内

使细胞遭受牵拉

牵拉0 min 为对照组

牵拉5 、10、20 、30、60 min 为牵拉组

实验重复3 次

实验数据利用方差分析和多重比较进行分析。然后利用FAKY397 和Y925 磷酸化的特殊抗体进行了免疫印迹实验

采用 信息分析程序(Mocha

Jandel Scientific)测定免疫印迹的密度

比较对照组与牵拉组

检测FAK 酪氨酸磷酸化

分析细胞形态 改变。【结果】在牵拉反应中

FAKY397 和Y925 的酪氨酸磷酸化水平比对照组明显增高(P <0.05)

并且峰值分别在牵拉 后5 min(2.75±0.51 倍

n =3)和20 min(2.98 ±0.58 倍

n =3)。另一方面

在突变FAK 转染的细胞中

牵拉引起的细胞 形态改变被有意义的阻滞了。【结论】牵拉引起的FAK 酪氨酸磷酸化在牵拉依赖的细胞形态改变中起着重要作用。