TNT-1是-种鼠IgG2a单抗

已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F（ah′）2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG

再通过阳离子交换树脂柱Mono S

用缓冲液A（20 mmol/L MES

pH6.3）和缓冲液B（lmol/L NaCI）

在快速蛋白液相色层（FPLC）系统上进行梯度洗脱分离

可制得纯净的TNT-1抗体

其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1

用胃蛋白酶消化

制备F（ah′）2片段

其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250

pH3.8

温度37℃

时间4～5 /小时。消化后的混合物

用protein A亲和结合法除去完整的IgG

其余的F（ab′）2和Fab、Fc等片段

在Mono S柱上

按前述的条件分离。产物TNT-1或F（ah′）2的免疫活性

用标记抗体和过量抗原结合的方法测定;分高纯化过程中的洗脱峰

用间接免疫荧光技术监测其活性。结果戾明

TNR-1的F（ab′）2片段的制备是成功的

色层分离纯化的方法简便而有效

并已成功地应用于批量生产。