将α-心钠素（α-hANF）基因克隆到PUC18载体上

经菌落原位杂交筛选鉴定出有α-hANF基因的克隆株。用BamⅡ和BamH Ⅰ消化并分离纯化得到含5′端部分α-hANF基因及PUC18载体的F1片段。用DNA合成仪合成3′端部分α-hANF基因的F2接头

在基因3′端加入谷氨酸的密码子GAA

作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位置

并去掉基因3′端的终止信号TGA

将原BamH Ⅰ接头改为EcoR Ⅰ接头。最后

将F1和F2片段与α-hANF基因酶促连接后进行转化

通过双酶切筛选出含有双拷贝α-hANF基因的转化子

并用双脱氧链终止法进行序列分析

证明核苷酸顺序正确。