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狭缝引导配体1-3’非翻译区抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用
Inhibitory Effects of the Slit Guidance Ligand 1-3’ Untranslated Region on the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts
- 中山大学学报（医学科学版） 2025年46卷第3期 页码：466-474
- 作者机构：
1.华南理工大学医学院，广东 广州 510006
2.南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院，广东 广州 510080
3.南方医科大学附属广东省人民医院检验科//广东省医学科学院，广东 广州 510080
4.南方医科大学附属广东省人民医院心内科//广东省医学科学院，广东 广州 510080
- 作者简介：
王娅，第一作者，研究方向：心肌纤维化的分子机制，E-mail：glitter7733@163.com
- 基金信息：国家自然科学基金(82470253;82200325;82300277;82400345);广东省自然科学基金(2023A1515010201;2025A1515011249;2025A1515010873)
DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2025.0311
中图分类号： R363.2收稿日期：2024-12-16，
录用日期：2025-04-02，
纸质出版日期：2025-05-20
- 稿件说明：
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王娅,伍华燕,高原等.狭缝引导配体1-3’非翻译区抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用[J].中山大学学报（医学科学版）,2025,46(03):466-474.
WANG Ya,WU Huayan,GAO Yuan,et al.Inhibitory Effects of the Slit Guidance Ligand 1-3’ Untranslated Region on the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2025,46(03):466-474.
王娅,伍华燕,高原等.狭缝引导配体1-3’非翻译区抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用[J].中山大学学报（医学科学版）,2025,46(03):466-474. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2025.0311.
WANG Ya,WU Huayan,GAO Yuan,et al.Inhibitory Effects of the Slit Guidance Ligand 1-3’ Untranslated Region on the Fibrotic Phenotype of Cardiac Fibroblasts[J].Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences),2025,46(03):466-474. DOI： 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2025.0311.
摘要
目的
2
研究狭缝引导配体1（Slit1）的3’非翻译区序列部分片段（Slit1-3’UTR）对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调节作用和可能机制。
方法
2
利用腺病毒介导在ICR乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达Slit1-3’UTR 1526nt序列（Slit1-3’UTR 1526nt），使用蛋白质免疫印迹技术评估mCFs中胶原Iα1/（COL1A1）、胶原IIIα1/（COL3A1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等纤维化相关基因的表达水平，结合EdU和Trans-well实验评估对mCFs增殖和迁移能力的影响。利用血管紧张素II（Ang Ⅱ）处理mCFs，检测Slit1-3’UTR 1526nt对于Ang Ⅱ处理mCFs中纤维化表型的影响。过表达Slit1-3’UTR 1526nt后转染miR-34a-5p的类似物，放线菌素D干预实验检测Slit1-3’UTR 1526nt的mRNA的稳定性。过表达Slit1-3’UTR 1526nt检测mCFs中miR-34a-5p及其靶基因SIRT1的水平。分别转染miR-34a-5p和靶向SIRT1基因的小干扰RNA（si-SIRT1），检测对Slit1-3’UTR 1526nt调控mCFs纤维化表型的影响。
结果
2
利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达Slit1-3’UTR 1526nt，过表达Slit1-3’UTR1526nt可显著抑制mCFs纤维化基因的表达和mCFs增殖、迁移能力，抑制Ang Ⅱ诱导mCFs的纤维化表型。放线菌素D实验结果显示转染miR-34a-5p降低mCFs中Slit1-3’UTR1526nt的稳定性，而过表达Slit1-3’UTR 1526nt时mCFs中miR-34a-5p水平降低。转染miR-34a-5p可促纤维化表型，并可逆转Slit1-3’UTR 1526nt对mCFs纤维化表型的抑制作用。在mCFs中过表达Slit1-3’UTR 1526nt显著升高miR-34a-5p靶基因SIRT1水平，在mCFs中分别转染miR-34a-5p和siRNA可一致性地逆转Slit1-3’UTR 1526nt抑制mCFs的纤维化表型。
结论
2
Slit1-3’UTR1526nt通过特异结合miR-34a-5p并增加其靶基因SIRT1表达发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。
Abstract
Objective
2
To study the regulatory effect of the partial sequence within the 3’ untranslated region （3’UTR） of slit guidance ligand 1 （Slit1） （Slit1-3’UTR） on the fibrotic phenotypes of cardiac fibroblasts （CFs） and its potential mechanism.
Methods
2
The adenovirus vector was used to overexpress the 1526nt sequence of Slit1-3’UTR in ICR neonatal mouse CFs （mCFs）. The expression of fibrosis-related genes in mCFs， such as collagen type 1 alpha1（COL1A1）， collagen type 3 alpha3 （COL3A1） and alpha smooth muscle actin （α-SMA） were detected by Western blot assay. The effect of Slit1-3’UTR 1526nt on the proliferation and migration of mCFs was assessed by EdU staining and Trans-well assays. Angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ） was used to treat mCFs， and the impact of Slit1-3’UTR 1526nt on the fibrotic phenotypes of Ang Ⅱ-induced mCFs was evaluated. After overexpression of Slit1-3’UTR 1526nt， miR-34a-5p mimic was transfected into mCFs， followed by actinomycin D treatment to detect the mRNA stability of Slit1-3’UTR 1526nt， and the levels of miR-34a-5p and its target gene SIRT1（si-SIRT1） in mCFs were determined. The effects of miR-34a-5p and small interfering RNA targeting SIRT1 on the Slit1-3’UTR 1526nt-mediated regulation of fibrotic phenotypes were also determined.
Results
2
Adenovirus-mediated overexpression of Slit 1-3’UTR 1526nt was achieved in mCFs. Overexpression of Slit 1-3’UTR 1526nt markedly inhibited the expression of the fibrosis-related genes， proliferation and migration of mCFs and fibrotic phenotypes of Ang Ⅱ. The results of actinomycin D assay showed that miR-34a-5p inhibited the stability of Slit1-3’UTR 1526nt in mCFs， while the level of miR-34a-5p was reduced in mCFs with overexpression of Slit1-3’UTR 1526nt. Transfection of miR-34a-5p promoted the fibrotic phenotypes， and reversed the inhibitory effect of Slit1-3’UTR 1526nt on the fibrotic phenotypes of mCFs. Overexpression of Slit1-3’UTR 1526nt significantly increased the level of miR-34a-5p target gene SIRT1 in mCFs. Transfection of miR-34a-5p and si-SIRT1 consistently reversed the inhibitory effects of Slit1-3’UTR 1526nt on the fibrotic phenotypes of mCFs.
Conclusion
2
Slit1-3’UTR1526nt inhibits the fibrotic phenotypes of mCFs by binding to miR-34a-5p and increasing the expression of its target gene of SIRT1.
关键词
Keywords
references
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